1、卡式(BioVue)交叉配血
(1)严格遵守《全国临床检验技术操作规范》,确保实验结果准确、可靠。
(2)范围:配血实验室及献血员筛选实验室。
(3)责任人:实验室工作人员。
(4)标准操作规程:
1.撕开试剂卡上的铝箔带,分别加人一滴 BUSS 液。
2.取 40μL 受血者压积红细胞和献血者压积红细胞加人 1mL 生理盐水中制成 4% 的红细胞悬液。
3.主测管中,加人受血者血清 40μL+ 供血者红细胞悬液 10μL。
4.次测管中,加人受血者红细胞悬液 10μL+ 供血者血清 40μL。
5.37℃ 孵育 10min,离心 5min。判读结果。
(5)注意事项
每日实验前,应先将有关试剂进行室温平衡,以防止冷凝集。
开启后的试剂卡请于 lh 内使用,如果柱内的试剂液面位于或低于玻璃珠的顶端,请勿使用该卡。
实验前将卡离心 3-4min,并进行标记。
卡封口已损坏时,管中干涸或有气泡时,卡不可使用。
样本红细胞悬液浓度要在 4% 左右。
纤维蛋白可吸附部分红细胞,应将血样离心。
液体应加至卡反应室中。
严格按标准程序操作可检出弱抗原抗体反应,弱凝集。
抗人球交叉配血不合,应设计实验进行分析。
某些药物、疾病可导致异常结果。
细菌及异常血清蛋白可影响结果。
2、Base 凝聚胺(Polybrene)交叉配血标准操作规程
(1)严格遵守《全国临床检验技术操作规范》,确保实验结果准确、可靠。
(2)范围:输血科实验室。
(3)责任人:实验室工作人员。
(4)标准操作规程
原理:红细胞表面带有大量的负电荷,以避免其产生自发性聚集,当红细胞悬浮在电解质溶液时,阳离子会被红细胞表面的负电荷所吸引,此时红细胞则被扩散的双层离子云所围绕,而形成 Zeta 电位,Zeta 电位决定红细胞之间的排斥作用。
凝聚胺技术首先利用低离子介质(low ionic medium,LIM),降低介质的离子强度,减少红细胞周围的阳离子云,以促进红细胞和血清(血浆)中的抗体结合。
其后,加人凝聚胺试剂,它是一种高价阳离子多聚物,是肝素中和剂,溶解后能产生很多正电荷,可以中和红细胞表面带有的负电荷,使红细胞 Zeta 电位降低,缩短红细胞之间的距离,使红细胞产生非特异性凝聚。
最后,加人悬浮液(Resuspending),悬浮液具有中和凝聚胺的作用,使正常的红细胞非特异性聚集散开,试验结果为阴性;但如果红细胞被相应的抗体致敏,则会被凝聚胺凝结,聚集就不会散开,试验结果为阳性。
试剂及器材试剂:低离子介质溶液,凝聚胺溶液(Polybrene Solution),悬浮液(Resuspending Soution),阳性质控液(Positiv eControl)。
器材:试管,离心机,载玻片,显微镜。
(5)交叉配血试验
取试管两支,标记主、次侧,主侧管加患者血清(血浆)2 滴,加供血者 3%-5% 红细胞悬液(洗涤或不洗涤均可)1 滴,次侧反之。
每管各加低离子介质 0.7mL,混合均匀后,再各加凝聚胺溶液 2 滴,并混合。
3400r/min,离心 10S,然后弃去上清,不要沥干,试管底残留约 0.1mL 液体。
轻轻摇动试管,目测红细胞有无凝集,如无凝集,则必须重做。
最后加人悬浮液 2 滴,轻轻转动试管混合并同时观察结果。如果在 30s 内凝集散开,代表是由凝聚胺引起的非特异性聚集,配血结果相合;如凝集不散开,则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应,配血结果不相合。如反应可疑,可进一步倒在载玻片上用显微镜观察。
(6)注意事项
可以用含 EDTA 的血浆代替血清使用。
若患者血清(血浆)含肝素,如血液透析患者,须多加 4-6 滴凝聚胺溶液以中和肝素。
试剂使用前请室温平衡。
如怀疑冷凝集素干扰试验结果,请在最后加人悬浮液时,将试管立即置人 37t 水浴中,轻轻转动试管混合,并在 30s 内观察结果。